|
|
Temas Livres do LIII Congresso Brasileiro de Cardiologia
TL 301
Mapeamento das sequências do gen da ECA associadas a ativação do gen durante o
desenvolvimento de hipertrofia cardíaca.
Edilamar M.Oliveira, Márcia K. Koike, Maria L. Junqueira e José E. Krieger
Lab. Bio. Mol. - InCor, F. Pró-Sangue, São Paulo, S.P.; Depto. Bioquímica UFRGS, RS
Objetivos: Determinar as regiões do promotor do gen da ECA de rato que contém
sequências regulatórias que ativam o gen durante o desenvolvimento de hipertrofia
cardíaca.
Métodos: Ratos foram tratados com isoproterenol (Iso) (0.3 mg/Kg/d, SC) ou
veículo por 7 dias. Moléculas recombinadas contendo fragmentos progressivamente menores
(1273, 1089, 477, 385, 252, 199 e 94 pares de base a partir do sítio de início da
transcrição) do promotor do gen da ECA ligados ao gen reporter da luciferase foram
injetados (140ug/100ul 20% sucrose) diretamente na parede do ventrículo esquerdo de rato
para caracterizar a função do promotor. A variação na eficiência de transfecção foi
corrigida pela co-transfecção de um vetor contendo o promotor viral LTR associado ao gen
reporter da beta galactosidase e normalização dos resultados. Após 7 dias de tratamento
e da transfecção o coração foi extraído para análise morfométrica e bioquímica. Os
níveis de luciferase e beta galoctosidase foram determinados por ensaio de
quimioluminescência usando-se um luminômetro.
Resultados: O tratamento com Iso resultou em hipertrofia de VE em todos os grupos
de animais. O Iso causou aumento da expressão de luciferase nos animais injetados com os
fragmentos 1273/Luc e 1089/Luc (4.41± 1.03 e 2.6± 0.4, respectivamente), enquanto que nos fragmentos 477/Luc,
385/Luc, 252/Luc, 199/Luc e 94/Luc o Iso não causou alterações significativas (1.23± 0.14, 1.67± 0.38, 2.05± 0.31, 1.71± 0.24, 1.24± 0.23, respectivamente).
Conclusões: Estes resultados sugerem que sequências regulatórias contidas no
intervalo 1273-1089 pares de base do sítio de início de transcrição do gen da ECA de
rato são responsáveis, pelo menos em parte, pela ativação do gen da ECA durante o
desenvolvimento de hipertrofia por injeção crônica de Iso.
Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq, FINEP, Fund. E.J. Zerbini, Fund. Pró-Sangue, S.P.
|
|
